SpCas9核酸酶
产品介绍
SpCas9核酸酶（Streptococcus pyogenes Cas9）源自化脓性链球菌，是CRISPR-Cas系统中最具代表性的RNA引导型DNA内切核酸酶，也是目前基因编辑领域应用最广泛的核酸酶。其蛋白分子量约为160 kDa，由1368个氨基酸组成，具有独特的双叶结构：识别叶（REC lobe）负责结合单链引导RNA（sgRNA）和靶标DNA，而核酸酶叶（NUC lobe）则包含HNH和RuvC两个催化结构域，分别负责切割与sgRNA互补的靶链和非互补链。这种结构设计使得SpCas9能够在sgRNA的精确引导下，通过识别NGG形式的PAM序列（原间隔序列邻近基序）定位到基因组特定位点，并在PAM上游约3 bp处引入平末端的DNA双链断裂（DSB）。随后，细胞通过两种主要的DNA修复途径——非同源末端连接（NHEJ）或同源定向修复（HDR）——来修复断裂，从而实现基因敲除、敲入或精确编辑。SpCas9之所以被广泛应用，归因于其高编辑效率、简便的靶向设计以及强大的可编程性。然而，其依赖NGG PAM序列的特点在一定程度上限制了靶向范围，且可能产生脱靶效应。为此，研究人员已开发出多种SpCas9变体，如高保真SpCas9（SpCas9-HF）和增强型SpCas9（eSpCas9），以提高特异性或扩展PAM识别能力。此外，SpCas9还被广泛应用于基础研究、基因治疗、作物改良等领域，推动着生命科学和医学的快速发展。
产品参数
| 参数 | 规格 |
| 来源 | 大肠杆菌重组表达 |
| 分子量 | ~160 kDa |
| 浓度 | 20μM |
| PAM序列 | 5'-NGG-3' |
| 切割位点 | PAM上游3bp |
| 切割产物 | 平末端DSB |
| 纯度 | ≥95% (SDS-PAGE) |
| 内毒素 | <1 EU/μg |
| 储存缓冲液 | 50 mM Tris-HCl，300 mM NaCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，50% Gly |
| 10 x 反应缓冲剂 | 50mM Tris-HCl，100mM NaCl，10mM MgCl2,100 μg/ml BSA，pH7.9 |
| 储存条件 | -80°C长期保存，-20°C短期保存 |
产品规格
规格 | 货号 | 浓度 | 体积 |
100pmol | GR100101 | 20μM | 5μL |
500pmol | GR100102 | 20μM | 25μL |
2500pmol | GR100103 | 20μM | 125μL |
应用场景
应用场景基因敲除研究：通过NHEJ修复产生移码突变，实现目标基因功能丧失
基因敲入：配合供体模板通过HDR实现精确序列插入
疾病模型构建：快速构建细胞系或动物疾病模型
功能基因组学筛选：大规模CRISPR文库筛选
基因治疗研究：校正致病突变的前临床研究
农业生物技术：作物改良和性状优化
参考文献
1. Jinek M, et al. (2012). A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity. Science. 337(6096):816-821.
2. Cong L, et al. (2013). Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems. Science.339(6121):819-823.
3. Nishimasu H, et al. (2014). Crystal structure of Cas9 in complex with guide RNA and target DNA. Cell. 156(5):935-949.
4. Doudna JA, Charpentier E. (2014). The new frontier of genome engineering with CRISPR Cas9. Science. 346(6213):1258096.