SpCas9-sfGFP核酸酶
产品介绍
SpCas9-sfGFP核酸酶是SpCas9与超折叠绿色荧光蛋白（superfolder GFP, sfGFP）的融合蛋白，旨在将基因编辑功能与荧光可视化能力集于一体。sfGFP是传统GFP的工程改造变体，通过引入特定的氨基酸突变，增强了蛋白质的折叠效率和稳定性，使其即使在与其他蛋白融合表达时，也能正确折叠并保持高强度荧光，克服了野生型GFP在融合蛋白中易 misfolding 或荧光淬灭的缺陷。
该融合蛋白的构建通常通过柔性多肽连接肽将sfGFP融合于SpCas9的N端或C端。研究表明，sfGFP的融合不会干扰SpCas9的核酸酶活性，蛋白仍能高效识别NGG PAM序列，并在sgRNA引导下对靶标DNA产生精确的双链断裂。同时，sfGFP的荧光信号为研究人员提供了一种直接、实时的追踪手段。
借助SpCas9-sfGFP，可以在活细胞水平实时监测Cas9蛋白的时空动态行为。通过荧光显微镜，可直观观察Cas9进入细胞的效率、在细胞质中的运输、跨越核膜的过程以及在细胞核内与染色质靶位点的结合与解离动力学。结合流式细胞术或高通量成像分析，还能定量评估不同递送系统（如脂质体、病毒颗粒或纳米材料）对Cas9的递送效率，为优化基因治疗载体设计提供依据。此外，该融合蛋白还可用于筛选影响Cas9活性的小分子化合物，或研究基因组内特定区域的结合动态，拓展了CRISPR技术在基础生物学和转化医学中的应用边界。
产品参数
| 参数 | 规格 |
| 来源 | 大肠杆菌重组表达 |
| 分子量 | ~187 kDa |
| 浓度 | 20μM |
| PAM序列 | 5'-NGG-3' |
| 切割位点 | PAM上游3bp |
| 切割产物 | 平末端DSB |
| 纯度 | ≥95% (SDS-PAGE) |
| 内毒素 | <1 EU/μg |
| 储存缓冲液 | 50 mM Tris-HCl，300 mM NaCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，50% Gly |
| 10 x 反应缓冲剂 | 50mM Tris-HCl，100mM NaCl，10mM MgCl2,100 μg/ml BSA，pH7.9 |
| 储存条件 | -80°C长期保存，-20°C短期保存 |
产品规格
| 规格 | 货号 | 浓度 | 体积 |
| 100pmol | GR100201 | 20μM | 5μL |
| 500pmol | GR100202 | 20μM | 25μL |
| 2500pmol | GR100203 | 20μM | 125μL |
应用场景
Cas9递送效率评估：实时监测RNP转染效率
细胞内定位研究：追踪Cas9的亚细胞分布
核导入动力学研究：研究NLS介导的核转运过程
流式细胞术分选：分选成功转染的细胞群体
CRISPR-imaging：基因组特定位点的活细胞成像
方法学优化：优化不同递送方法的效率
参考文献
1. Tanenbaum ME, et al. (2014). A protein-tagging system for signal amplification in gene expression and fluorescence imaging. Cell. 159(3):635-646.
2. Knight SC, et al. (2015). Dynamics of CRISPR-Cas9 genome interrogation in living cells. Science. 350(6262):823-826.