nCas9(D10A)-sfGFP切口酶

产品介绍

nCas9(D10A)-sfGFP是在SpCas9基础上通过引入D10A点突变构建的切口酶 variant 与超折叠绿色荧光蛋白的融合体，兼具精准的DNA单链切割能力和实时可视化追踪特性。D10A突变特异地失活了RuvC核酸酶结构域，而保留HNH结构域的切割活性，因此该酶在sgRNA引导下仅切割与靶序列互补的DNA链，产生精确的单链切口，而非野生型SpCas9所致的双链断裂。融合的sfGFP标签具备优异的折叠效率和荧光稳定性，可在活细胞水平实时报告蛋白的亚细胞定位、动态分布及递送效率，为研究切口酶行为提供了便捷的光学工具。

nCas9的独特价值体现在其灵活的应用策略中。单独使用时，单链切口主要通过细胞内高保真的碱基切除修复途径精准修复，几乎不产生随机插入或缺失突变，这使其成为研究DNA损伤修复机制或需要最小化基因组干扰场景的理想工具。而当采用双切口酶策略时，研究人员可设计一对靶向相邻位点的sgRNA，引导两个nCas9在基因组靶区域的两条链上分别产生切口，协同形成功能性双链断裂。这种方式保留了与野生型Cas9相当的基因编辑效率，但由于需要两个sgRNA同时识别并协同作用，对单个脱靶位点的耐受性极低，从而显著提升了编辑的特异性，降低脱靶风险。该融合蛋白也因此广泛应用于需要高保真基因编辑的基础研究和潜在治疗场景。