dCas9-VP64转录激活蛋⽩
产品介绍
dCas9-VP64是将核酸酶失活的Cas9（dead Cas9, dCas9）与VP64转录激活结构域融合而成的人工嵌合蛋白，代表了第一代CRISPR激活（CRISPRa）系统的核心元件。该蛋白的dCas9部分携带D10A和N863A双突变，完全丧失了DNA切割活性，但保留了由sgRNA引导精准结合目标DNA序列的能力。VP64激活结构域则由四个拷贝的单纯疱疹病毒VP16转录激活域串联而成，VP16本身是一种强效的真核生物转录激活因子，能够高效招募细胞内源的转录复合物。
当特异性sgRNA引导dCas9-VP64结合至靶基因启动子区域时，VP64结构域通过招募转录预起始复合物、组蛋白乙酰转移酶和中介体复合物等转录机器，促进RNA聚合酶II的聚集和转录起始，从而实现目标基因的转录上调。该系统通常可实现2-5倍的基础基因激活效果，激活效率受靶位点选择、染色质可及性和细胞类型等因素影响。为了克服单一sgRNA激活效率有限的局限，研究者常采用多sgRNA策略——设计多个靶向同一基因启动子不同区域的sgRNA，通过协同效应显著增强转录激活效果，某些优化体系甚至可实现数百倍的基因上调。
产品参数
参数 | 规格 |
来源 | 大肠杆菌重组表达 |
分子量 | ~172 kDa |
浓度 | 20μM |
PAM序列 | 5'-NGG-3' |
突变位点 | D10A + N863A |
激活结构域 | VP64 |
纯度 | ≥95% (SDS-PAGE) |
内毒素 | <1 EU/μg |
储存缓冲液 | 50 mM Tris-HCl，300 mM NaCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，50% Gly |
10 x 反应缓冲剂 | 50mM Tris-HCl，100mM NaCl，10mM MgCl2,100 μg/ml BSA，pH7.9 |
储存条件 | -80°C长期保存，-20°C短期保存 |
产品规格
| 规格 | 货号 | 浓度 | 体积 |
| 100pmol | GR100401 | 20μM | 5μL |
| 500pmol | GR100402 | 20μM | 25μL |
| 2500pmol | GR100403 | 20μM | 125μL |
应用场景
基因转录激活：上调内源基因表达
功能获得性筛选：CRISPRa全基因组筛选
细胞重编程：激活多能性相关基因促进细胞命运转换
表观遗传学研究：研究转录激活对染色质状态的影响
基因功能研究：替代cDNA过表达进行功能研究
药物靶点验证：通过激活潜在靶基因验证治疗策略
参考文献
1. Gilbert LA, et al. (2013). CRISPR-mediated modular RNA-guided regulation of transcriptionin eukaryotes. Cell. 154(2):442-451.
2. Perez-Pinera P, et al. (2013). RNA-guided gene activation by CRISPR-Cas9–basedtranscription factors. Nat Methods. 10(10):973-976.
3. Chavez A, et al. (2015). Highly efficient Cas9-mediated transcriptional programming. NatMethods. 12(4):326-328.
4. Ramu G, et al. (2018). Paired D10A Cas9 nickases are sometimes more efficient than individual nucleases for gene disruption.Nucleic Acids Res. 46(12):e71.