TREX2-FrCas9核酸酶
产品介绍
TREX2-FrCas9是FrCas9与三链修复外切核酸酶2（Three-prime Repair Exonuclease 2, TREX2）融合而成的工程化蛋白，通过引入外切酶活性显著改变了CRISPR-Cas9系统产生的DNA修复结果。TREX2是一种具有3'-5'方向性的外切核酸酶，能够从DNA双链断裂末端逐步消化核苷酸，与FrCas9融合后可在切割位点产生更大范围的片段删除。
传统的CRISPR-Cas9系统在引入DNA双链断裂后，通过细胞内的非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常产生小片段的插入或缺失突变（多数小于10 bp）。这种小范围编辑对于某些应用场景可能不足以完全破坏基因功能，特别是针对非编码RNA、调控元件或具有结构功能的蛋白质结构域。TREX2-FrCas9融合蛋白突破了这一限制：当FrCas9在靶位点产生双链断裂后，融合的TREX2立即对断裂末端进行3'-5'方向的外切消化，扩大断裂间隙，迫使细胞通过NHEJ修复时产生显著更大的删除片段，可达数百碱基对。
这一特性使TREX2-FrCas9特别适用于需要彻底破坏基因功能的应用场景，如microRNA基因敲除、长链非编码RNA失活或功能性结构域的完全消除。以microRNA基因为例，这类短序列元件往往只有20-22 bp的成熟序列，传统Cas9产生的小片段indel可能无法有效破坏其发夹结构或加工位点，而TREX2-FrCas9产生的大片段删除则可确保整个功能单元的彻底失活。相比需要设计双sgRNA协同切割来实现大片段删除的传统策略，TREX2-FrCas9仅需单一sgRNA即可实现类似效果，简化了实验设计并降低了脱靶风险。
产品参数
| 参数 | 规格 |
| 来源 | 大肠杆菌重组表达 |
| 分子量 | ~160 kDa |
| 浓度 | 20μM |
| PAM序列 | 5'-NNTA-3' |
| 切割产物 | 平末端DSB |
| 纯度 | ≥95% (SDS-PAGE) |
| 内毒素 | <1 EU/μg |
| 储存缓冲液 | 50 mM Tris-HCl，300 mM NaCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，50% Gly |
| 10 x 反应缓冲剂 | 50mM Tris-HCl，100mM NaCl，10mM MgCl2,100 μg/ml BSA，pH7.9 |
| 储存条件 | -80°C长期保存，-20°C短期保存 |
产品规格
| 规格 | 货号 | 浓度 | 体积 |
| 100pmol | GR100901 | 20μM | 5μL |
| 500pmol | GR100902 | 20μM | 25μL |
| 2500pmol | GR100903 | 20μM | 125μL |
应用场景
大片段删除：高效产生范围基因组删除
非编码RNA敲除：microRNA、lncRNA等小RNA基因的有效敲除
调控元件删除：删除增强子、沉默子等调控序列
基因完全失活：确保靶基因完全功能丧失
结构变异研究：模拟大片段缺失相关疾病
参考文献
1. He Y, et al. (2024). Expanding plant genome editing scope and profiles with CRISPR-FrCas9systems targeting palindromic TA sites. Plant Biotechnol J. 22(9):2488-2503.
2. Yin J, et al. (2022). Optimizing genome editing in plants using TREX2-Cas fusion proteins.Nature Plants. 8(8):930-939.
3. Rui Tian, et al. (2025). Systematic high-throughput evaluation reveals FrCas9’s superior specificity and efficiency for therapeutic genome editing. Science Advances. 11(13):7334.