LbCas12a核酸酶
产品介绍
LbCas12a（原名LbCpf1）是源自毛螺菌科细菌ND2006的V-A型CRISPR核酸酶，代表了一类与Cas9系统截然不同的基因编辑工具。该蛋白由约1228个氨基酸组成，具有独特的结构域组织和生化特性，在基因组编辑领域展现出与SpCas9互补的应用价值。
LbCas12a最显著的特点体现在其工作机制上：首先，它仅依赖crRNA引导即可识别靶序列，无需tracrRNA的辅助，简化了RNA组件的设计；其次，它识别富T的PAM序列5'-TTTV-3'（V代表A、C或G），这一特性使其能够有效靶向SpCas9难以覆盖的AT富集基因组区域，扩展了全基因组的可编辑范围；第三，LbCas12a切割DNA后产生5-7 nt的5'突出粘性末端，而非Cas9的平末端，这一特性可能有利于特定方向的基因插入；此外，LbCas12a还具有trans切割活性，即在特异性识别并切割靶标DNA后，其核酸酶结构域被激活，可非特异性切割体系中的任意单链DNA分子。
在应用层面，LbCas12a在哺乳动物细胞中表现出强大的编辑活性，是目前应用最广泛的Cas12a同源物之一。其独特的trans切割活性已被开发为高灵敏度核酸检测平台，如DETECTR系统，通过将靶标核酸扩增与Cas12a的trans切割报告系统偶联，可实现病毒、细菌等病原体的快速检测。LbCas12a的多重加工能力也使其在多重基因编辑和转录调控领域展现出独特优势，成为CRISPR工具家族中不可或缺的重要成员。
产品参数
参数 | 规格 |
来源 | 大肠杆菌重组表达 |
分子量 | ~143 kDa |
浓度 | 20μM |
PAM序列 | 5'-TTTV-3' |
切割位点 | PAM下游18-23nt |
切割产物 | 5'突出粘性末端（5-7nt） |
纯度 | ≥95% (SDS-PAGE) |
内毒素 | <1 EU/μg |
储存缓冲液 | 10 mM Tris-HCl，300 mM NaCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，50% Gly，pH 7.5 |
10 x 反应缓冲剂 | 10mM Tris-HCl，50mM NaCl，10mM MgCl2,100 μg/ml BSA，pH7.9 |
储存条件 | -80°C长期保存，-20°C短期保存 |
产品规格
| 规格 | 货号 | 浓度 | 体积 |
| 100pmol | GR101001 | 20μM | 5μL |
| 500pmol | GR101002 | 20μM | 25μL |
| 2500pmol | GR101003 | 20μM | 125μL |
应用场景
AT富集区基因编辑：靶向富T的PAM位点
精确基因敲入：粘性末端促进方向性DNA片段插入
多重基因编辑：单⼀crRNA阵列实现多靶点同时编辑
核酸检测（DETECTR）：利用trans切割活性进行病原体检测
植物基因组编辑：适合AT含量较高的植物基因组
基因治疗研究：替代SpCas9用于特定靶位点
参考文献
1. Zetsche B, et al. (2015). Cpf1 is a single RNA-guided endonuclease of a class 2 CRISPR-Cassystem. Cell. 163(3):759-771.
2. Chen JS, et al. (2018). CRISPR-Cas12a target binding unleashes indiscriminate single-strandedDNase activity. Science. 360(6387):436-439.
3. Strohkendl I, et al. (2018). Kinetic basis for DNA target specificity of CRISPR-Cas12a. MolCell. 71(5):816-824.