⾏业痛点
⽂库设计与构建
○ 基因组文库sgRNA数量庞⼤(6-10万条),设计和合成成本⾼
○ ⽂库均⼀性影响筛选质量,低质量⽂库导致假阴性
○ 激活(CRISPRa)和抑制(CRISPRi)⽂库的设计逻辑不同于敲除⽂库
筛选执行
○ ⼤规模细胞培养和⽂库感染操作复杂
○ 筛选覆盖度(coverage)不⾜导致结果不可靠
○ 筛选周期长,条件优化困难
数据分析
○ 测序数据量⼤,分析流程复杂
○ 候选基因排序算法(MAGeCK、BAGEL等)选择与参数优化
○ 从hit list到可验证靶点的转化需要⽣物学洞察
验证与转化
○ 筛选hit的单基因验证周期长
○ 从细胞表型到动物模型的转化验证