dCas9-GFP蛋白
产品介绍
dCas9-GFP是将绿色荧光蛋白（GFP）融合到核酸酶失活Cas9（dCas9）上形成的一种多功能成像工具，实现了基因组位点的实时可视化追踪。该融合蛋白以dCas9为基础骨架，其携带的D10A和N863A双突变完全消除了核酸内切酶活性，但完整保留了由单向导RNA（sgRNA）引导的DNA靶向结合能力。GFP标签则提供了稳定明亮的荧光信号，使研究人员能够在活细胞中直接观察特定基因组序列的位置和动态变化。
dCas9-GFP的核心价值在于将"看不见"的基因座转变为"可见"的荧光点。当表达dCas9-GFP和特异性sgRNA后，融合蛋白可精准结合靶标DNA区域，在荧光显微镜下呈现为清晰的核内聚焦点。这一技术突破了传统FISH等方法只能用于固定细胞的局限，使得追踪活细胞中染色质的动态行为成为可能，包括端粒 dynamics、基因座在细胞周期中的空间位置变化以及染色质相互作用等。
在《TriTag: an integrative tool to monitor chromatin dynamics and gene expression in living cells》研究中，dCas9-GFP被赋予了更重要的角色——作为TriTag系统中负责DNA可视化的核心传感器。在该多色、多模态活细胞成像体系中，dCas9-GFP不再是孤立工作的成像工具，而是与追踪转录活性和蛋白表达的其他荧光模块协同作用，实现了将特定染色质位点的空间动态与其转录状态及翻译产物直接关联分析，为研究基因调控机制提供了前所未有的整合视角。
产品参数
参数 | 规格 |
来源 | 大肠杆菌重组表达 |
分子量 | ~193 kDa |
浓度 | 20μM |
PAM序列 | 5'-NGG-3' |
突变位点 | D10A + N863A |
纯度 | ≥95% (SDS-PAGE) |
内毒素 | <1 EU/μg |
储存缓冲液 | 50 mM Tris-HCl，300 mM NaCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，50% Gly |
10 x 反应缓冲剂 | 50mM Tris-HCl，100mM NaCl，10mM MgCl2,100 μg/ml BSA，pH7.9 |
储存条件 | -80°C长期保存，-20°C短期保存 |
产品规格
规格 | 货号 | 浓度 | 体积 |
100pmol | GR101801 | 20μM | 5μL |
500pmol | GR101802 | 20μM | 25μL |
2500pmol | GR101803 | 20μM | 125μL |
应用场景
活细胞动态成像：
在显微镜下实时追踪特定基因在细胞核中的位置、运动轨迹。
观察染色体的三维结构，或标记端粒长度变化。传统FISH技术只能做固定后染色，而dCas9可以看到活的细胞过程。
TriTag 系统中的应用：通过观察 dCas9-GFP 信号的变化，获得了一些关于染色质动态与转录调控关系的发现
参考⽂献
1. Gilbert LA, et al. (2013). CRISPR-mediated modular RNA-guided regulation of transcriptionin eukaryotes. Cell. 154(2):442-451.
2. Perez-Pinera P, et al. (2013). RNA-guided gene activation by CRISPR-Cas9–basedtranscription factors. Nat Methods. 10(10):973-976.
3. Chavez A, et al. (2015). Highly efficient Cas9-mediated transcriptional programming. NatMethods. 12(4):326-328.
4. Ramu G, et al. (2018). Paired D10A Cas9 nickases are sometimes more efficient than individual nucleases for gene disruption.Nucleic Acids Res. 46(12):e71.
5. Haiyue Xu, et al. (2020). TriTag: an integrative tool to correlate chromatin dynamics and gene expression in living cells. Nucleic Acids Res. 48(22):13013-13014.