GeneRulor RNA-Tn5 (RNase H Fusion) Transposase是舒桐科技基于Tn5与RNase H-like超家族结构同源性开发的新型融合转座酶。该产品将优化的RNA结合域（RBD）或失活型RNase H-like结构域与Tn5催化核心进行功能性融合，在保留Tn5高效标记活性的同时，增强对RNA/DNA杂合链的结合与处理效率。RNA-Tn5可在逆转录完成后直接对RNA/cDNA杂交体进行片段化与接头连接，省去第二条链合成步骤，实现从总RNA到测序文库的“一步法”快速转化，尤其适配低起始量样本、单细胞转录组、微量珍贵样本及高通量批量RNA-seq建库等应用场景。
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GeneRulor RNA-Tn5 (RNase H Fusion) Transposase
1. 产品简介
传统RNA-seq文库制备流程通常需要经过RNA提取、反转录、第二条链合成、DNA片段化、末端修复、接头连接等多步操作，存在流程冗长、样本损耗大、成本高等问题，对低起始量样本及高通量筛选场景的兼容性有限。尽管Tn5转座酶已被广泛用于DNA文库构建，其在RNA/DNA杂合链上的应用潜力已在SHERRY、TRACE-seq等方法中得到验证，但仍有进一步开发空间。
传统RNA-seq建库流程存在明显局限：
传统多步法建库：需依次完成反转录、第二链合成、片段化、末端修复及接头连接，操作步骤多、实验周期长，并在多步纯化过程中造成样本损耗；
普通Tn5：已可直接对RNA/cDNA杂交体进行tagmentation，但对RNA/DNA杂合链的结合稳定性和处理效率仍有进一步优化空间；
RNA-Tn5：通过RBD或失活型RNase H-like结构域融合，增强杂合链识别与处理能力，可在保留Tn5标记活性的同时简化RNA-seq建库流程。
结构生物学研究表明，Tn5转座酶与RNase H、逆转录病毒整合酶同属Polynucleotidyl Transferase RNase H-like Fold超家族，共享保守的DDE催化基序及类似的β-折叠骨架，具备结合RNA/DNA异源双链的分子基础。基于这一结构特征，RNA-Tn5能够在逆转录完成后直接对RNA/cDNA杂交体进行片段化与接头连接，为转录组研究提供更快速、更经济、更低样本损耗的建库解决方案。
2. 应用领域
（1）RNA/cDNA杂交体一步法建库（Hybrid Tagmentation RNA-seq）
无需第二条链合成即可快速完成RNA-seq文库构建，兼容bulk RNA与单细胞样本，显著缩短实验周期并降低多步操作带来的样本损耗。
（2）新生RNA标记与追踪（Nascent RNA Labeling）
兼容SLAM-seq等代谢标记方法，可对标记后的新生转录本进行高效建库与动态追踪，适用于转录动力学、RNA稳定性及药物处理响应研究。
（3）单细胞RNA测序（scRNA-seq）
低起始量、快速流程的单细胞转录组分析，适配高通量筛选需求，有助于提升低输入样本的文库复杂度和数据稳定性。
（4）微量/珍贵样本转录组分析
适用于FFPE样本、穿刺活检、流式分选细胞等低量RNA样本，通过减少纯化和第二链合成步骤降低样本损耗，提高微量样本建库成功率。
（5）高通量药物筛选与功能基因组学
支持快速、低成本的批量RNA-seq文库制备，适配大规模药物筛选、扰动实验及功能基因组学研究，为高通量转录组数据采集提供简化流程。
参考文献
[1] DI L, FU Y, SUN Y, et al. RNA sequencing by direct tagmentation of RNA/DNA hybrids[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2020, 117(6): 2886-2893.
[2] LU B, DONG L, YI D, et al. Transposase-assisted tagmentation of RNA/DNA hybrid duplexes[J]. eLife, 2020, 9: e54919.
[3] LU B, YI C. TRACE-seq: Rapid, Low-Input, One-Tube RNA-seq Library Construction Based on Tagmentation of RNA/DNA Hybrids[J]. Current Protocols, 2023, 3(4): e735.
